دسته بندی‌ دوره‌ها
0

بلاگ

تریتا آکادمی بلاگ اخبار علمی و مقالات PCR- Polymerase Chain Reaction

PCR- Polymerase Chain Reaction

1399/07/20
ارسال شده توسط
اخبار علمی و مقالات
80.53k بازدید

فهرست مطالب

تکنیک واکنش زنجیره ای پلیمراز  (  PCR- Polymerase Chain Reaction)

واکنش زنجیره ای پلیمراز یک تکنیک آزمایشــگاهی است که  همانند سازی و تکثیر قطعه ای از  DNAرا به میلیون ها برابرآن امکان پذیر می سازد .
تکنیک واکنش زنجیره ای پلیمراز  (PCR)  شامل یک چرخه سه مرحله ایی است :
1 –مرحله تقلیب ( Denaturation ) که در این مرحله مولکول های دو رشته ای DNA بوسیله حرارت بالا (حدود 94 درجه سانتی گراد ) از همدیگر جدا گردیده و به مولکول های تک رشته ای تبدیل می شوند.
2 –مرحله پیوند زنی ( Hybridization ) که در این مرحله کاهش دمای واکنش صورت می گیرد تا اینکه پرایمرها بتوانند به مولکول های DNA تک رشته ای پیوند زده شوند .
درجه حرارت مورد استفاده برای این مرحله می تواند از 50 درجه سانتی گراد تا 65 درجه سانتی گراد متغیر باشد.
3 –مرحله توسعه (Extension )که در این مرحله آنزیم Taq پلیمر از DNA ،پرایمرها را در روی  DNA تک رشته ای امتداد می دهد تا DNA دو رشته ای جدید بسازد.
درجه حرارت الزم برای این مرحله 72درجه سانتی گراد می باشد.
اجزای لازم برای یک PCR استاندارد:
  • DNA الگو
  • پرایمرها
  • پلیمراز مقاوم به حرارت
  • داکسی نوکلئوتید تری فسفات dNTP
  • ژل آگارز
  • ترموسایکلر
در اولین چرخه PCR از هر رشته الگو یک دو رشته ای جدید بوجود می آید که خود باعث مضاعف شدن تعداد کپی های ناحیه هدف می شود،
یعنی در پایان هر چرخه ( پس از دناتوره شدن، جفت شدن و گسترده شدن) تعداد کپی های DNA هدف به صورت تئوری مضاعف می شود.
هر چرخه PCR یک تا سه دقیقه زمان می برد .
برای تکثیر DNA  این چرخه دمایی چندین بار تکرار می شود (25 تا 40 بار ) و برای راحتی، از یک ترموسایکلر استفاده می شود.
این دستگاه می تواند بسرعت دما را تغییر دهد و نمونه ها را به مدت زمان مناسب در دمای دلخواه نگه دارد یعنی کاملا قابل برنامه ریزی است.
قبل از اختراع این دستگاه از سه محفظه آبی با دماهای95 ،55 و 72 استفاده می شد و لوله های واکنش بصورت دستی بین این محفظه ها جابجا می شد.
چرخه 1 : محصولات حاصل از DNA الگو طول معین ندارند .
چرخه 2 : اولین محصولات تک رشته ای با طول معین در نتیجه اتصال پرایمر روی محصولات تک رشته ای تولید شده در چرخه 1 تولید می شود.
چرخه 3 : منجر به تولید اولین محصولات دو رشته ای با طول معین می شود.
چرخه 4 و چرخه های بعدی : منجر به تکثیر نمایی محصولات با طول معین می شوند.
در اولین چرخه PCR ، مولکول الگوی دو رشته ای باز می شود، پرایمرها به توالی مکمل خود روی الگوی تک رشته ای می چسبند
و ساخت DNA با DNA پلیمراز مقاوم به حرارت آغاز می شود.
نتیجه این چرخه از PCR این است که به ازای هر کپی اولیه، دو کپی از توالی هدف تولید می شود.
در چرخه حرارت دادن بعدی مولکول های دو رشته ای ( Heteroduplex ) ناهمسان  شامل یک رشته الگوی اصلی و یک رشته ساخته شده جدید
که طی اولین واکنش سنتز DNA تولید شده اند، دناتوره می شوند. اکنون هر کدام از رشته های DNA به عنوان الگویی برای دور بعدی ساخت DNA عمل می کنند .
در چرخه سوم اولین محصولات PCR دو رشته ای با طول صحیح تشکیل می شوند.
در چرخه های بعدی تعداد کپی های DNA هدف، بصورت نهایی افزایش می یابند.
در هر چرخه PCR تعداد کپی های توالی هدف دو برابر می شود یعنی بعد از 20 بار چرخه PCR با کارایی 100 درصد، هر الگوی موجود در شروع واکنش به یک میلیون رشته جدید تبدیل خواهد شد
پرایمر چیست؟
مولکول های DNA تک رشته ای کوتاه ( اولیگو نوکلئوتیدها ) بوسیله تکنیک های شیمیایی بصورت سریع و ارزان ساخته می شوند.
این ها وقتی به DNA تقلیب شده افزوده می شوند، DNA پلیمراز Taq از آنها به عنوان پرایمر استفاده کرده و DNA جدید در داخل آزمایشگاه سنتز می شود.
پرایمر ها، توالی هایی از جنس DNA با طولی حدود 20 نوکلئوتید هستند که بصورت مصنوعی ساخته میشوند .
باید سعی  شــود تا جفت پرایمری هایی که انتخاب شــوند Tm  آنها  از همدیگر بیش از  5درجه ســانتیگراد اختلاف نداشــته باشــند.( Tm دمای ذوب پرایمرهاست)
منطقه ای از پرایمر که باید کاملا با الگو منطبق باشد، انتهای 3 پریم است
زیرا که این قسمت انتهایی پرایمر است که بوسیله DNA پلیمراز طویل می شود.
DNA  پلیمرار های مقاوم به حرارت
آنزیم DNA پلیمراز Taq از باکتری گرما دوست ترموس آکواتیکوس (aquaticus )جدا شده است.
این آنزیم در دماهای بالاتر PCR پایداری دارد و این امکان را به ما می دهد که با یک بار افزودن آنزیم در شروع واکنش، چرخه های تکثیر مکرری داشته باشیم
(دمای بهینه آنزیم برای ساخت DNA حدود 71 درجه سانتی گراد است).
معموال دو دسته DNA پلیمراز براساس الگوی مورد استفاده لازم هستند :
  • -DNA پلیمرازهای وابسته به DNA
  • -DNA پلیمرازهای وابسته به RNA که ترانس کریتپازهای معکوس (reverse )نیز نامیده میشوند.
ساختار DNA به کمک DNA پلیمراز ، همیشه در جهت 5 پریم به 3پریم انجام می شود.
بعضی DNA پلیمرازها فعالیت اگزو نوکلئازی 3 پریم به 5 پریم نیز دارند که فعالیت ویرایش گری نامیده می شود و اضافه شدن باز صحیح به رشته DNA در حال رشد را کنترل می کند.
با اضافه شدن دزوکسی نوکلئوتیدهای صحیح( dNTP )  ، تولید DNA های جدید دو رشته ای توسط DNA پلیمراز آغاز می شود.
نکته : باز شدن DNA در یک سلول نیازمند یک مجموعه چند جزئی شامل تعداد زیادی آنزیم و پروتئین است
اما در PCR به سادگی با یک مرحله حرارت دادن بنام Denaturation که منجر به شکستن پیوندهای هیدورژنی بین جفت بازها در DNA دو رشته ای می شود . جایگزین شده است .
محصولات باید پس از پایان PCR ارزیابی شوند، روش معمول برای این کار تعیین اندازه قطعه DNA روی ژل آگاروز است.
آزمایش روی ژل مدرکی دال بر موفقیت یا شکست است. روشهایی مثلreal-time PCR  وجود دارند که به ارزیابی روی ژل نیاز ندارند
و این امکان را می دهند که بتوان کینتیک تجمع محصول را در هر چرخه از PCR دنبال کرد.
اشتراک گذاری:
برچسب ها:

مطالب زیر را حتما مطالعه کنید

آزمون های آماری ناپارامتریک

چکیده آزمون‌های ناپارامتریک من ویتنی و ویلکاکسون به‌عنوان جایگزین‌های قدرتمند برای آزمون‌های پارامتریک، زمانی کاربرد...

155 دیدگاه

به گفتگوی ما بپیوندید و دیدگاه خود را با ما در میان بگذارید.

  • Every topic discussed here confirms how important an integrated approach and attention to detail are. The exchange of experience helps to find new solutions, test hypotheses and see familiar things from the other side.
    As practice shows, success consists of many small things, especially when it comes to the operation of complex mechanisms. The choice of professional hydraulic lines for special equipment contributes to the smooth operation of the equipment and can be a guarantee of trouble-free production.

    پاسخ

  • Мы предлагаем дипломы любой профессии по разумным ценам. Мы можем предложить документы ВУЗов, которые находятся в любом регионе РФ. Дипломы и аттестаты выпускаются на бумаге высшего качества. Это позволяет делать настоящие дипломы, которые не отличить от оригиналов. orikdok-v-gorode-tomsk-70.online

    پاسخ

  • Заказать диплом университета по доступной стоимости можно, обратившись к надежной специализированной фирме. Мы оказываем услуги по продаже документов об окончании любых ВУЗов РФ. Приобрести диплом о высшем образовании– hitechservicesites.copiny.com/question/details/id/1112005

    پاسخ

  • Покупка дипломов ВУЗов по всей России и СНГ — с печатями, подписями, приложением и возможностью архивной записи (по запросу).
    Документ максимально приближен к оригиналу и проходит визуальную проверку.
    Мы гарантируем, что в случае проверки документа, подозрений не возникнет.

    – Конфиденциально
    – Доставка 3–7 дней
    – Любая специальность

    Уже более 4495 клиентов воспользовались услугой — теперь ваша очередь.

    Открыть — ответим быстро, без лишних формальностей.

    پاسخ

  • Зарабатывай на криптовалюте уже сегодня!
    Открой для себя надёжную криптобиржу с высокой ликвидностью, минимальными комиссиями и продвинутой системой безопасности. Торгуй популярными криптовалютами на удобной платформе с простой регистрацией.
    Начни свой путь в криптотрейдинге прямо сейчас — подробности здесь! =>>kra33.cc

    پاسخ

  • Мы изготавливаем дипломы любой профессии по приятным тарифам. Мы готовы предложить документы ВУЗов, которые находятся в любом регионе Российской Федерации. Дипломы и аттестаты печатаются на “правильной” бумаге самого высокого качества. Это дает возможность делать государственные дипломы, не отличимые от оригинала. orikdok-3v-gorode-samara-63.online

    پاسخ

  • Мы изготавливаем дипломы любой профессии по приятным ценам. Дипломы производят на настоящих бланках государственного образца Приобрести диплом об образовании good-diplom.ru

    پاسخ

  • Приобрести диплом университета!
    Заказ официального диплома через проверенную и надежную компанию дарит ряд достоинств. Быстро и просто приобрести диплом о высшем образовании у проверенной фирмы: doks-v-gorode-kurgan-45.online

    پاسخ

  • Где приобрести диплом по актуальной специальности?
    Купить диплом университета по доступной цене вы сможете, обратившись к проверенной специализированной компании.: zakaz-na-diplom.ru

    پاسخ

  • Наши специалисты предлагают выгодно и быстро заказать диплом, который выполнен на оригинальной бумаге и заверен печатями, штампами, подписями официальных лиц. Диплом пройдет любые проверки, даже с использованием специально предназначенного оборудования. bisound.com/forum/showthread.php?p=2197481#post2197481

    پاسخ

  • Приобрести диплом университета по невысокой стоимости возможно, обращаясь к надежной специализированной компании. Мы готовы предложить документы университетов, которые находятся на территории всей Российской Федерации. traveldir.ru/kupit-gosudarstvennij-diplom-s-zaneseniem-v-reestr-2/

    پاسخ

  • 1xBet—ведущий букмекерский сервис,которая предлагаетширокие возможностиивыгодные предложениядля своих пользователей.Неважно,являетесь ли вы новичком в мире ставокилиуже бывалым беттором,бонусные коды 1xBet—это шансрасширить возможности для выигрыша.активация промокода — этосекретный промокод,активирующая до 32 500 рублей на счет.Эта акция распространяетсятолько для новых игроковипри первом входе в системуони получают 130% от суммы пополнения первого депозита.Активируя промокод от 1xBet, вы открываете для себя ряд бонусов.Они позволяют вам получить дополнительные средства для ставок,тем самым расширяя потенциал выигрыша.Полученные бонусы можно применять в разных форматах ставок,в спортивных ставках, онлайн-казино, покере и других играх от 1xBet.Таким образом, вы можете наслаждаться игрой и одновременно увеличивать свои шансы на успех.

    پاسخ

  • Приобрести диплом любого университета!
    Мы изготавливаем дипломы любой профессии по приятным тарифам— asxdiplommy.com

    پاسخ

  • Мы предлагаем документы любых учебных заведений, которые расположены в любом регионе Российской Федерации. Заказать диплом любого университета:
    dreamforum.ru/new/topic/24

    پاسخ

  • Мы предлагаем дипломы любой профессии по приятным тарифам. Мы предлагаем документы ВУЗов, которые расположены в любом регионе России. Дипломы и аттестаты выпускаются на бумаге высшего качества. Это позволяет делать настоящие дипломы, не отличимые от оригиналов. orikdok-4v-gorode-tula-71.ru

    پاسخ

  • Купить диплом об образовании. Приобретение документа о высшем образовании через надежную компанию дарит ряд достоинств для покупателя. Такое решение позволяет сберечь как личное время, так и существенные деньги. orikdok-v-gorode-smolensk-67.online

    پاسخ

  • Производство и поставка – соединение болтом чертеж производства Северсталь метиз ОСПАЗ со склада в г.Орел.
    Продажа болт РіРѕСЃС‚ 7802 оптом и в розницу по низким ценам.
    Полный каталог всей метизной продукции, описания, характеристики, ГОСТы и технические условия.
    Офоррление заказа и доставка в сжатые сроки. Возможна отгрузка железнодорожным транспортом. Цены производителя.

    پاسخ

  • Покупка дипломов ВУЗов по всей России и СНГ — с печатями, подписями, приложением и возможностью архивной записи (по запросу).
    Документ максимально приближен к оригиналу и проходит визуальную проверку.
    Мы гарантируем, что в случае проверки документа, подозрений не возникнет.

    – Конфиденциально
    – Доставка 3–7 дней
    – Любая специальность

    Уже более 4159 клиентов воспользовались услугой — теперь ваша очередь.

    Здесь — ответим быстро, без лишних формальностей.

    پاسخ

  • Приобрести диплом университета по выгодной стоимости можно, обратившись к проверенной специализированной фирме. Купить документ университета можно в нашей компании в Москве. orikdok-5v-gorode-penza-58.online

    پاسخ

  • Мы предлагаем оформление дипломов ВУЗов в Москве — с печатями, подписями, приложением и возможностью архивной записи (по запросу).
    Документ максимально приближен к оригиналу и проходит визуальную проверку.
    Мы даем гарантию, что в случае проверки документа, подозрений не возникнет.

    – Конфиденциально
    – Доставка 3–7 дней
    – Любая специальность

    Уже более 1647 клиентов воспользовались услугой — теперь ваша очередь.

    Сайт компании — ответим быстро, без лишних формальностей.

    پاسخ

  • Покупка дипломов ВУЗов в Москве — с печатями, подписями, приложением и возможностью архивной записи (по запросу).
    Документ максимально приближен к оригиналу и проходит визуальную проверку.
    Мы гарантируем, что в случае проверки документа, подозрений не возникнет.

    – Конфиденциально
    – Доставка 3–7 дней
    – Любая специальность

    Уже более 4502 клиентов воспользовались услугой — теперь ваша очередь.

    Узнать подробнее — ответим быстро, без лишних формальностей.

    پاسخ

  • Покупка дипломов ВУЗов в Москве — с печатями, подписями, приложением и возможностью архивной записи (по запросу).
    Документ максимально приближен к оригиналу и проходит визуальную проверку.
    Мы гарантируем, что в случае проверки документа, подозрений не возникнет.

    – Конфиденциально
    – Доставка 3–7 дней
    – Любая специальность

    Уже более 2893 клиентов воспользовались услугой — теперь ваша очередь.

    Купить государственный диплом — ответим быстро, без лишних формальностей.

    پاسخ

  • Мы изготавливаем дипломы любых профессий по невысоким тарифам. Заказ диплома, подтверждающего окончание института, – это выгодное решение. Заказать диплом университета: givebackabroad.org/employer/diplomy-grup-24

    پاسخ

  • Приглашаем посетить наш интернет магазин https://misterdick.ru/ по
    продаже дженериков в Москве с быстрой доставкой по МСК в день заказа.
    Высокое качество дженериков производства Индии в наличии для покупки.
    Так же отправляем заказы во все регионы почтой России

    پاسخ

  • Не знаете, что приготовить на завтрак? А может, хотите порадовать свою семью вкусным ужином, но никак не определитесь с блюдом? Тогда обязательно посетите набирающий популярность канал Baranki Gnu. На нём есть огромное количество рецептов, среди которых Вы наверняка найдёте подходящие. Полный перечень можно увидеть тут https://youtube.com/c/BarankiGnu . К примеру, последние блюда – это печенье на рассоле и сборная мясная солянка. Необычно, правда? Вот именно из-за таких блюд все Ваши близкие точно будут в восторге.

    پاسخ

  • Хотите рассказать своему ребёнку не только интересную, но ещё и поучительную сказку? Или, может, перед сном стишок гармоничный почитать? Тогда надо знать, какому автору отдать предпочтение. Обратите внимание на творчество Людмилы Васильевны Блохиной, размещённое на сайте https://luchisolka.com/ . Вы наверняка будете приятно удивлены тем, что большинство материалов доступно к использованию совершенно бесплатно, и они действительно порадуют как мальчика, так и девочку своим глубоким содержанием.

    پاسخ

  • Информация о том, как протекает коронавирусная инфекция по ссылке https://mitokey.ru/koronavirus-simptomy-lechenie-profilaktika-zabolevanija/ открывается действительно правдиво. О том, какие могут коронавирусы вызывать заболевания, также расписывается на сайте – данные являются действительно проверенными. Внимание уделяется рассмотрению синдрома поражения респираторного тракта, штаммам коронавируса, общей инфекционной интоксикации и не только. Благодаря изучению информации, можно предотвратить тяжелые последствия.

    پاسخ

  • Изготовление металлоконструкций на сайте https://vipzavod.ru всегда происходит ответственно. Сейчас на рынке строительные организации и заводы нуждаются в качественной продукции как в Российской Федерации, так и за ее пределами. Обращаясь в такую компанию или найдя завод, каждый покупатель с легкостью можно купить нужный металлический прокат. Качественные металлические конструкции существенно ускоряют строительство жилого помещения – в отдельных случаях, без фундамента обойтись даже вполне реально.

    پاسخ

  • Продвинутое продвижение сайтов Казахстана в сети Интернет с помощью сайта http://napas.kz производится всегда ответственно. Мы занимаемся обучением SEO специалистов, созданием и продвижением сайтов в любом городе Казахстана. Представители компании прекрасно понимают, как именно бизнес необходимо вести именно в то время, когда кризис нужно преодолеть. Когда отсутствуют деньги на развитие и рекламу, однако необходимо рекламировать свои предложения, люди обращаются к профессионалам этого сайта.

    پاسخ

  • Развиваться в процессе игры на сайте https://pro100.game/lpv874713/ можно действительно здорово. Иметь возможность обеспечить собственное будущее и стараться сделать все для этого – это правильно! Получить доступ к различным обучающим курсам экспертов бизнеса можно действительно просто – при этом, освоение многочисленных актуальных интернет-профессий будет осуществляться при тренировках на реально существующем бизнесе. Большое внимание уделяется и автоматизации бизнеса.

    پاسخ

  • Скачать песни в хорошем качестве можно на сайте https://muzna.net без регистрации. Пользователям предлагается большой выбор аудиозаписей, которые для удобства разделены на категории по странам. Здесь можно найти популярные русские и зарубежные песни, известные хиты разных лет, а также последние новинки 2020 года. Понравившиеся композиции можно бесплатно скачать на телефон или компьютер. Перед загрузкой прослушайте аудиозапись, чтобы оценить качество звучания.

    پاسخ

  • На сайте https://hd.xn--7-htb9a8c.xn--p1ai/ много есть действительно качественного кинематографа. Осенний, зимний или любой другой день скоротать можно легко – при этом, открывать можно новые факты. Создавать уникальное новогоднее настроение либо придумывать развлекательные и образовательные мероприятия легко можно. Кроме фильмов, есть на сайте и действительно интересный контент музыкальный, спортивный, игровой, телевизионный и не только. Смотреть можно также в том числе и сериалы.

    پاسخ

  • Узнать можно с сайтом https://permdtp.ru/ человека, который звонил с неизвестного номера. Для определения и уточнения, достаточно всего лишь использовать бесплатные возможности. С помощью сервиса также можно достаточно просто определить, порядочный ли продавец на Авито или нет. Мошенники, которые звонят от имени банковских работников, всегда могут быть вычислены – любой подозрительный телефонный номер России непременно будет определен. Также можно узнать, откуда вызов осуществлялся по номеру телефона.

    پاسخ

  • На портале https://laylo.me размещены музыкальные треки, которые можно слушать в онлайн-режиме или бесплатно загружать на телефон или компьютер. Собраны песни русских и зарубежных исполнителей с отличным качеством звучания. Популярные мелодии, которые чаще всего слушают и скачивают пользователи, собраны в топ песен. На сайте можно найти актуальные новинки и самые известные хиты. Здесь можно скачивать песни по отдельности, сборниками или слушать мелодии онлайн в любое время.

    پاسخ

  • Большие возможности мира антиквариата на сайте https://y-antik.ru открываются – каталог действительно обширный. Из дому люди часто выбрасывают вещи, однако зачастую они могут иметь особую ценность и стоить действительно дорого. Коллекционеры сейчас понимают, как следует поступать – оценка вещей будет всегда действительно справедливой и честной. Разные предметы и несерийные вещи, а также художественные произведения и нумизматические единицы приобретаться могут действительно быстро.

    پاسخ

  • Информационный портал https://veb-whatsapp.ru предлагает ознакомиться с полезными статьями, посвященными приложению WhatsApp. Из материала вы узнаете о том, как сделать видеозвонок, как правильно подключить приложение на компьютер, быстро установить статус и о многом другом. Ценные советы и рекомендации помогут наладить работу приложения. Вы узнаете обо всех доступных функциях и возможностях мессенджера. Удобная навигация позволит быстрей сориентироваться в выборе. Новые статьи публикуются каждый день.

    پاسخ

  • River Talks – это новое приложение, где можно общаться, заводить друзей и знакомиться с единомышленниками. Для прохождения регистрации на сайте https://river-talks.com/ нужно заполнить простую форму. После этого пользователь получает доступ к полному функционалу. Чтобы привлечь внимание к проекту компания-разработчик выплачивает монеты за пользование мессенджером, которые можно потратить на рекламу и другие услу . Полученные монеты хранятся на электронном кошельке, который встроен в мессенджер.

    پاسخ

  • Компания «ПермЭнергоМарш» разрабатывает и производит противотаранные устройства заграждения и металлоконструкции. На сайте компании https://www.protivotarannoe.com/ можно ознакомиться со всеми предложениями и подобрать мобильные заграждения, дорожные блокираторы, антивандальные шлагбаумы, противотаранные ворота, заграждения периметра. Здесь представлены инженерно-технические средства охраны профессионального уровня, которые защищены патентами и имеют сертификаты качества.

    پاسخ

  • Почтовые индексы стран СНГ на сайте https://clfr.ru можно просмотреть достаточно просто. Для людей, которые проживают на территории Российской Федерации, Казахстана, Украины и Белоруссии нет абсолютно никаких преград в плане просмотра необходимой информации. Акцентировать внимание также стоит на том, что информация является актуальной и периодически просматривается на актуальность. Многие люди уже смогли благодаря данной площадке воспользоваться уникальными возможностями.

    پاسخ

  • Завод К-ЖБИ, на сайте которого по адресу http://gbisp.ru
    располагается множество информации относительно изготовления действительно качественных железобетонных изделий, предлагает наилучшие условия сотрудничества на рынке. Материалы и изделия всегда подбираются действительно качественные – сборный железобетон используется действительно надежно. Строительство полного цикла всегда является доступным, вплоть до сдачи объекта непосредственно под ключ – специалисты хорошо знают свое дело.

    پاسخ

  • Гонки за халявой с помощью предложения https://na-halyavu.com/how_it_works/ в итоге получаются успешными. Бесплатно можно проходить регистрацию – при этом, для получения приза, каждому человеку понадобится лишь выполнить задание. Финансовых средств при использовании возможностей проекта вносить совершенно не нужно. Кроме этого, расходами на доставку также занимается сайт. Проведение розыгрышей с ценными призами еще никогда не было настолько упрощенным, как с данным проектом.

    پاسخ

  • Атлас автомобильных дорог Москвы и области просмотреть на сайте https://map-msk.ru/index.html
    можно совершенно в любое время. Карты Новой Москвы этого года, а также другие карты являются оптимизированными для просмотра на любых устройствах, вплоть до смартфона и планшета. Карты 125 районов Москвы и 12 административных округов доступны абсолютно для каждого человека. Московская кольцевая автомобильная дорога, метро – карты эти имеются на сайте и выложены относительно недавно.

    پاسخ

  • Плюсы и минусы разных видов единоборств сайт https://xn—-9sbbcprfjdkzb4b8a9azg.xn--p1ai/mma/ освещает. В боевых искусствах удары могут наноситься руками и ногами, однако в различных других использоваться могут броски, приемы и захваты. В смешанных единоборствах техники часто могут объединяться, однако бойцу зачастую нужно больше пространства для противостояния практически любому сопернику. В залах заниматься можно бесплатно, а иногда – платно. С помощью данного ресурса, найти лучший спортивный клуб становится просто.

    پاسخ

  • Официальный блог фотографа Галины Савинич располагается по адресу https://savinich.ru и может освещать действительно полноценно все важные моменты. Относительно технологий, происходящего в мире, научных моментов, путешествий, политического и общественного резонанса можно новости узнать также на сайте. По тематикам видео и игр также достаточно выходит публикаций – чтобы убедиться в этом, необходимо лишь перейти на сайт. Данный проект можно действительно смело советовать друзьям и знакомым.

    پاسخ

  • С помощью сайта компании https://bellaboom.ru приобрести действительно качественную встраиваемую бытовую технику для кухни можно действительно оперативно. Демо-магазин, подарочные сертификаты, контактные данные и информацию о компании на сайте можно достаточно просто изучить. Кроме этого, внимание уделяется и новостным материалам, и данным по торговым маркам. Обслуживание клиентов всегда происходит ответственно, а для сравнения можно воспользоваться специальным списком.

    پاسخ

  • При желании обойти даже самых многочисленных конкурентов, можно использовать возможности сайта https://industria.by абсолютно без проблем. Специалисты данного проекта могут создавать самолично полноценный сайт – при этом, страницы в дальнейшем могут добавляться самостоятельно и без дополнительных знаний. Более детальную информацию о предоставляемых услугах, а также прайс – лист можно увидеть на сайте. Есть возможность связаться с представителями проекта через форму обратной связи.

    پاسخ

  • Основные и дополнительные условия сотрудничества на сайте https://www.brevnoibrus.ru/brevno-ocb/ непременно следует прочитать для тех, кому нужно оцилиндрованное бревно. В теплое время года обрабатывается бревно антисептиком “Неомид”, а разработка проектной документации всегда осуществляется своевременно. Цены на сайте указываются вместе с погрузкой в автотранспорт – при этом, стоимость доставки не учитывается. Помимо этого, сруб дополнительно комплектоваться может тем, что нужно заказчику.

    پاسخ

  • Эмульсия против выпадения и для роста волос Perfleor 5, 50 ml может быть приобретена на сайте https://beardpride.ru/protiv-vypadeniya-volos/emulsiya-protiv-vypadeniya-i-dlya-rosta-volos-perfleor-5-50-ml любым клиентом и абсолютно в любое время. Цены всегда указываются подлинные – товары имеются в наличии и обновляются постоянно. При осуществлении заказа, необходимо указывать артикул работающему консультанту. Если понравился товар, то непременно следует рассказать о нем собственным друзьям.

    پاسخ

  • Популярные биографии по адресу https://07a.ru располагаются уже достаточно давно. Как женский, так и мужской жизненный путь прекрасно открываются в хронологической и логической последовательности. Полезные статьи также непременно следует изучить, поскольку в них указывается действительно интересная и полезная для изучения информация. Достаточно данных есть на сайте и о том, чем в данный момент занимается та или иная известная личность – при этом, данные всегда проверенными являются.

    پاسخ

  • Хайп – проекты высокодоходные найти на сайте https://investmonik.com можно. Мощные проекты, которые действительно хорошо платят, найти можно тут всегда – вся информация представлена совершенно ясно как для накопления процентов и получения пассивного дохода, так и для общего понимания. При использовании данного проекта, обязательно необходимо помнить о том, что риски могут возникать совершенно неожиданно, однако грамотный подход может обеспечить высокий уровень безопасности.

    پاسخ

  • Каждому заядлому игроку в World of Warcraft не обойтись без аддонов и актуальной информации об игре. Сайт http://mmo4u.ru/
    представляет собой невероятно большой каталог качественных дополнений для проекта, которые пригодятся даже самым опытным игрокам. Здесь можно найти аддон на любую из версий World of Warcraft

    پاسخ

  • Все заглянувшие на сайт https://knifemaster-shop.ru/ могут приобрести ножи, которые являются действительно качественными. В данном магазине имеется действительно доступная ценовая политика, которая помогает сэкономить действительно значительную сумму финансовых средств. Как китайские, так и американские ножи, а также ножи европейского производства реализуются на постоянной основе, поскольку сотрудничество с поставщиками является действительно слаженным – взаимодействие обеспечивается на должном уровне.

    پاسخ

  • Скачать кс 1.6 совершенно бесплатно можно на https://counter-strike.vip – именно на данном сайте располагается действительно проработанная русская версия игры. Сборки можно загружать абсолютно без проблем – при этом, популярный шутер в любой стране популярен – в него играют повсеместно. Данный модернизированный мод для Half-Life стал полноценной игрой, и это видно на сайте – графика и механика, сервера и дополнительные возможности функционала сайта помогают прочувствовать игру полноценно.

    پاسخ

  • На главной странице известного сайта https://kinogo.gg располагается множество наиболее интересных фильмов, а также сериалов. По годам, жанрам и другим характеристикам подбирать можно кинематографические творения – делать это можно действительно просто. Зарегистрироваться непременно стоит – по регистрационным данным можно входить действительно просто. Документальные фильмы, мультфильмы, сериалы, документальные творения и аниме располагаются в ТОП-подборках также.

    پاسخ

  • Продажа и доставка металла на сайте https://metallotpalycha.ru осуществляется. Востребованные и выгодные способы изготовления металлических изделий всегда обеспечиваются. Проволока, сетка, балки, трубы и арматура – это и есть реализуемый металлический прокат. Компания продает в розницу и оптом металлический прокат – основные преимущества сотрудничества освещаются на портале. Доставка по Москве и области в любое время суток обеспечивается – другие услуги также предоставляются вовремя.

    پاسخ

  • На сайте https://revizzoro.ru осуществляет свою деятельность информационно-рекомендательный некоммерческий ресурс. Различные рейтинги и обзоры товаров и услуг – это то, что всегда можно отыскать на сайте. Сайт не работает с производителями и интернет-магазинами, а также не занимаемся рекламой продукции и не продает ее. Информация, которая представлена на сайте, предоставлена на сайте из открытых источников. Большинство товаров, попадающих в рейтинг, проанализированы.

    پاسخ

  • Профессионально разрабатываемые сайты заказать на http://web-74.ru можно всегда. Личные кабинеты, маркетплейсы, разработка сайтов, у которых всегда будет высокая конверсия – это далеко не все, что предоставляется. Узнать подробности можно совершенно бесплатно – на сайте можно экономить на поиске и начинать с получения консультации. Ответы получать можно на разные вопросы – относительно стоимости разработки проекта, увеличения продаж, стратегического подхода в работе и не только.

    پاسخ

  • При помощи доски объявлений http://imlist.ru/ можно продать или приобрести различные товары – от автомобилей и до воздушного транспорта. Можно на сайте многие отыскать услуги, которые могут быть действительно интересны. Много объявлений имеются и по теме недвижимости – квартиры, комнаты, дома и гаражи приобрести или же продать можно. Кроме этого, на сайте также можно познакомиться с мужчинами либо женщинами. Найти можно работу, рации и смартфоны, банковские предложения, мебель и не только.

    پاسخ

دیدگاهتان را بنویسید